基因工程名詞解釋和問(wèn)答

1、基因工程（genetic engineering）： 就是在分子水平上，提�。ɑ蚝铣桑┎煌�生物的遺傳物質(zhì)（基因），在體外切割，再和一定的載體拼接重組，然后把重組的DNA 分子引入細(xì)胞或生物體內(nèi)，使這種外源DNA（基因）在受體細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制與表達(dá)，按人們的需要繁殖擴(kuò)增基因或生產(chǎn)不同的產(chǎn)物或定向地創(chuàng)造生物的新性狀，并能穩(wěn)定地遺傳給下代。

2、載體(vector)：基因工程中，攜帶目的基因進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的工具。

3、限制性核酸內(nèi)切酶（restriction endonuclease）：定義：是一類能識(shí)別雙鏈DNA分子中的特定核苷酸序列，并由此切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。 主要從原核生物中分離純化出來(lái)。

4、1）同裂酶（isoschizomers）： 來(lái)源不同，識(shí)別位點(diǎn)和切割位點(diǎn)均相同的限制性內(nèi)切酶。即同裂酶產(chǎn)生同樣的切割，形成同樣的末端。同裂酶對(duì)識(shí)別序列的甲基化狀態(tài)有不同的限制性反應(yīng)。2）同尾酶（isocaudamer）：來(lái)源不同，識(shí)別序列也不相同，但切出的DNA的片段具有相同的末端序列。3）同位酶：識(shí)別序列相同，但切割位點(diǎn)不同。

5、酶活性單位：1個(gè)酶活性單位就是指1min能轉(zhuǎn)化1mmol底物的酶量。

6、DNA連接酶：能催化雙鏈DNA的片段靠在一起的3′羥基末端和5′端磷酸基團(tuán)末端之間形成的磷酸二酯鍵，使兩末端連接的一種核酸酶。

7、DNA聚合酶：作用是指在引物和模板的存在下，把脫氧核糖核苷酸（dNTP）連續(xù)地加到引物鏈的 3’ –OH 末端，催化核苷酸的聚合作用。

8、DNA連接酶能夠封閉雙螺旋DNA骨架上的缺口，但不能封閉裂口。缺口（nick）：即在雙鏈DNA的某一條鏈上兩個(gè)相鄰核苷酸之間失去一個(gè)磷酸二酯鍵所出現(xiàn)的單鏈斷裂；

9、常用連接酶：http://www.ahsrst.cnli DNA 連接酶 、T4 DNA 連接酶（常用）。既能進(jìn)行粘性末端的連接，又能進(jìn)行平末端的連接，但http://www.ahsrst.cnli DNA 連接酶進(jìn)行平末端連接的效率低。

10、DNA連接酶的連接條件：必須是兩條雙鏈DNA、一條鏈的3‘末端有游離的羥基（-OH），而另一條鏈的5’端具有一個(gè)磷酸基團(tuán)（-P）、需要能量（ATP或NAD+）。

11、T4多核苷酸激酶：是一種磷酸化酶，可將ATP的磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移到DNA或RNA的5‘末端。1）5‘加磷酸基團(tuán)。對(duì)于缺乏5‘磷酸的DNA或合成接頭進(jìn)行磷酸化。2）末端標(biāo)記。

12、末端轉(zhuǎn)移酶TDT 來(lái)源：小牛胸腺 活性：不依賴模板的 DNA 聚合酶，能催化 dNTP 摻入 DNA 3′-OH 末端。當(dāng)反應(yīng)液中只有一種脫氧核苷酸時(shí)，可形成僅有一種核苷酸組成的3′尾巴，稱之為同聚物加尾。功能：1）主要用于給外源DNA的片段及載體分子加上互補(bǔ)的同聚物尾巴，便于連接。2）末端標(biāo)記

13、堿性磷酸酶：細(xì)菌堿性磷酸酶（bacterial alkaline phosphatase，簡(jiǎn)稱BAP）、小牛腸堿性磷酸酶（calf intestinal alkaline phosphatase，簡(jiǎn)稱CIP）特性：催化除去DNA或RNA 5′端的磷酸基團(tuán)。功能：1）DNA分子片段5′末端的去磷酸化，防止自身連接。2）可作為5′-末端標(biāo)記的DNA的片段。

14、分子雜交技術(shù)：分子雜交是用于檢測(cè)混合樣品中特定的核酸分子和蛋白質(zhì)分子是否存在，以及其相對(duì)分子質(zhì)量的大小的一種方法。雜交技術(shù)：是利用DNA分子的變性、復(fù)性以及堿基互補(bǔ)配對(duì)的高度精確性，對(duì)某一特異性DNA序列進(jìn)行探查的技術(shù)。

15、Southern雜交(預(yù)雜交、雜交、洗膜) 分子雜交：預(yù)雜交： 將結(jié)合了 DNA 分子的濾膜先與特定的預(yù)雜液進(jìn)行預(yù)雜交，也就是將濾膜的空白處用魚(yú)精 DNA 或牛奶蛋白封閉起

來(lái)，防止在雜交過(guò)程中濾膜本身對(duì)探針的吸附。雜交：在一定的溶液條件和溫度下，將標(biāo)記的核酸探針與濾膜混合，如果濾膜上的 DNA 分子存在與探針同源的序列，那么探針將與該分子形成雜合雙鏈，從而吸附在濾膜上。洗膜： 經(jīng)過(guò)一定的洗滌程序?qū)⒂坞x的探針?lè)肿映�去�?/p>

16、探針（probe）：用作檢測(cè)的被標(biāo)記的短片段特異DNA或RNA序列。

17、探針的種類：基因組DNA探針、 cDNA 探針、寡核苷酸探針、RNA探針

18、標(biāo)記物：同位素標(biāo)記：32P、35S、3H等。非同位素標(biāo)記：地高辛、生物素、熒光素等

19、Northern 雜交：檢測(cè)特定RNA（主要是mRNA）分子的方法。與Southern雜交的不同：靶核酸：RNA RNA電泳: 變性凝膠電泳 應(yīng)用：主要用于分析mRNA分子大小及mRNA的轉(zhuǎn)錄情況

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