【摘要】目的研究冰片對(duì)5�擦u色氨酸（5�睭TP）抗抑郁作用的影響。方法采用小鼠懸尾試驗(yàn)、大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)，以動(dòng)物不動(dòng)的失望時(shí)間為指標(biāo)；采用利血平致小鼠抑郁模型，以眼瞼下垂程度和體溫為觀(guān)察指標(biāo),評(píng)價(jià)冰片對(duì)5�擦u色氨酸抗抑郁作用的影響。結(jié)果冰片可加強(qiáng)5�睭TP縮短懸尾及強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)中的失望時(shí)間；可增強(qiáng)5�睭TP對(duì)抗由利血平所致的小鼠眼瞼下垂和體溫下降。結(jié)論冰片可增強(qiáng)5�睭TP的抗抑郁作用。

【關(guān)鍵詞】冰片;5�擦u色氨酸；抑郁；懸尾試驗(yàn)；強(qiáng)迫游泳試驗(yàn);眼瞼下垂

Abstract:ObjectiveTostudytheroleofBorneolinenhancingantidepressanteffectsof5�瞙ydroxytryptophane(5�睭TP).MethodsMousetailsuspensiontest,ratforcedswimmingtestandreserpine�瞚nducedmousedepressionmodelwereusedtoevaluatetheroleofborneolinenhancingantidepressanteffectsof5�瞙ydroxytryptophane(5�睭TP).ResultsBorneolsignificantlyenhancedtheeffectsof5�睭TPtoshortendisappointmenttimeinmousetailsuspensiontestandratforceswimmingtestandtoantagonizetheptosis,hypothermiainmiceinducedbyreserpine.ConclusionBorneolenhancesantidepressanteffectsof5�瞙ydroxytryptophane.

Keywords:borneol,5�瞙ydroxytryptophane,depression,tailsuspensiontest,ratforceswimmingtest

抑郁癥（depression）是嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的常見(jiàn)疾病，也是各類(lèi)精神疾病中發(fā)病率最高的疾病。據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新調(diào)查表明，全球現(xiàn)在有2～4億人口正為抑郁癥所苦惱。關(guān)于抑郁癥的發(fā)病機(jī)制，較為公認(rèn)的有單胺遞質(zhì)假說(shuō)，該假說(shuō)認(rèn)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)去甲腎上腺素（NE）、5�擦u色胺（serotonin,5�睭T）等單胺遞質(zhì)的減少可導(dǎo)致抑郁癥的產(chǎn)生。5�擦u色氨酸（5�睭TP）是5�睭T的前體物質(zhì)，補(bǔ)充腦內(nèi)5�擦u色氨酸，可間接提高腦內(nèi)5�睭T的濃度。為了提高5�睭TP的腦內(nèi)濃度，增強(qiáng)療效，將5�擦u色氨酸和冰片配成復(fù)方制劑，采用多種抑郁癥的動(dòng)物模型觀(guān)察其藥效,現(xiàn)報(bào)告如下。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)NIH小鼠和昆明種小鼠，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，雄性，體質(zhì)量20～22g，許可證號(hào)：SCXK（粵）2003-002，粵監(jiān)證字2005A011。SPF級(jí)SD大白鼠，雄性，體質(zhì)量160～180g,由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK（粵）2003-002，粵監(jiān)證字2005A010。

1．2藥品及試劑

5�擦u色氨酸(5�睭TP):由深圳勁創(chuàng)生物技術(shù)有限公司提供，產(chǎn)品批號(hào)為041028。冰片：廣東藥學(xué)院醫(yī)院藥房購(gòu)買(mǎi)。利血平注射液：廣東邦民制藥廠(chǎng)有限公司生產(chǎn)，產(chǎn)品批號(hào)為050309。阿米替林：由常州四藥制藥有限公司提供，產(chǎn)品批號(hào)為KD9149。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1小鼠懸尾試驗(yàn)［1］

2.1.1實(shí)驗(yàn)分組

84只雄性NIH小鼠,體質(zhì)量18～22g,隨機(jī)分成7組，每組12只，空白對(duì)照組每天灌胃給予生理鹽水，阿米替林陽(yáng)性對(duì)照組每天灌胃給予阿米替林20mg/kg，5�睭TP低、高劑量組分別每天灌胃給予5�睭TP100mg/kg、200mg/kg，5�睭TP低劑量+冰片組和5�睭TP高劑量+冰片組分別每天灌胃給予100mg/kg5�睭TP+50mg/kg冰片，200mg/kg5�睭TP+50mg/kg冰片,冰片組只給冰片50mg/kg。連續(xù)給藥3d，第4天給藥后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

2.1.2小鼠不動(dòng)時(shí)間的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)在上午8～12時(shí)進(jìn)行，灌胃給藥后30min，把小鼠尾用膠布貼在木條上，使頭離地5cm，以擋板隔離動(dòng)物視線(xiàn)，開(kāi)始時(shí)小鼠努力掙脫，以后因無(wú)法逃脫而停止掙扎，呈現(xiàn)間歇性不動(dòng)狀態(tài)，以連續(xù)3s以上的不動(dòng)時(shí)間為有效不動(dòng)時(shí)間，記錄6min內(nèi)小鼠累積不動(dòng)時(shí)間。

2.2大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)

2.2.1預(yù)試

將雄性SD大鼠單個(gè)放入水深為15cm的玻璃圓筒中（高40cm，直徑18cm），水溫25℃,水深可稍作調(diào)整，以大鼠后足剛可觸及筒底又不足以支撐身體為宜。初放入時(shí)，大鼠強(qiáng)迫游泳并掙扎向上爬或潛入筒底，2～3min后活動(dòng)逐漸減弱，出現(xiàn)間歇性不動(dòng)狀態(tài)，且時(shí)間越來(lái)越長(zhǎng)，5～6min后不動(dòng)狀態(tài)的時(shí)間占總時(shí)間的80％左右，預(yù)試15min以后將大鼠吹干。

2.2.2實(shí)驗(yàn)分組

剔除預(yù)試中的不合格者，將合格的70只大白鼠隨機(jī)分成7組，每組10只，空白對(duì)照組每天灌胃給予生理鹽水，阿米替林陽(yáng)性對(duì)照組每天灌胃給予阿米替林20mg/kg，5�睭TP低、高劑量組分別每天灌胃給予5�睭TP100mg/kg、200mg/kg，5�睭TP低劑量+冰片組和5�睭TP高劑量+冰片組分別每天灌胃給予100mg/kg5�睭TP+50mg/kg冰片，200mg/kg5�睭TP+50mg/kg冰片，冰片組只給冰片50mg/kg。連續(xù)給藥3d，第4天給藥后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。

2.2.3大鼠不動(dòng)時(shí)間的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)在上午8～12時(shí)進(jìn)行，灌胃給藥后30min，在與預(yù)試條件完全相同的情況下，把大鼠放入圓筒中，以連續(xù)3s以上的不動(dòng)時(shí)間為有效不動(dòng)時(shí)間，記錄5min內(nèi)大鼠強(qiáng)迫游泳的累積不動(dòng)時(shí)間。

2.3利血平所致小鼠抑郁模型(眼瞼下垂試驗(yàn))［2-4］

將雄性昆明種小鼠80只,隨機(jī)分成8組,正常組不給任何藥物,空白對(duì)照組每天灌胃給予生理鹽水，阿米替林陽(yáng)性對(duì)照組每天灌胃給予阿米替林20mg/kg，5�睭TP低、高劑量組分別每天灌胃給予5�睭TP100mg/kg、200mg/kg，5�睭TP低劑量+冰片組和5�睭TP高劑量+冰片組分別每天灌胃給予100mg/kg5�睭TP+50mg/kg冰片，200mg/kg5�睭TP+50mg/kg冰片,冰片組只給冰片50mg/kg。連續(xù)給藥7d,末次給藥30min后,每只小鼠按2.5mg/kg腹腔注射利血平(0.1mL/10g),觀(guān)察小鼠眼瞼下垂情況,準(zhǔn)確記錄1h內(nèi)的眼瞼下垂度和肛門(mén)體溫,觀(guān)察自發(fā)活動(dòng)、耳尾顏色及腹瀉等情況。按Rubin分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),判斷下垂度：0度:正常開(kāi)目;1度:眼瞼下垂1/4;2度:眼瞼下垂1/2;3度:眼瞼下垂3/4;4度:眼瞼完全閉合。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示，試驗(yàn)中所獲試驗(yàn)數(shù)據(jù)，進(jìn)行多組均數(shù)間的顯著性檢驗(yàn)采用方差分析（ANOVA），再進(jìn)行兩兩比較,以P<0.05為差異有顯著性。

3結(jié)果

3.1小鼠尾懸掛試驗(yàn)

與生理鹽水對(duì)照組相比，5�睭TP低、高劑量組和加冰片的5�睭TP低、高劑量組小鼠尾懸掛6min內(nèi)的失望時(shí)間均顯著縮短（P<0.05或P<0.01），并呈一定的劑量依賴(lài)性。冰片組不能縮短尾懸掛小鼠6min內(nèi)的失望時(shí)間。加冰片的5�睭TP低、高劑量組縮短尾懸掛小鼠6min內(nèi)的失望時(shí)間比5�睭TP低、高劑量組顯著增強(qiáng)（P<0.05）。見(jiàn)表1。

表1冰片和5�擦u色氨酸對(duì)小鼠強(qiáng)迫懸尾試驗(yàn)失望時(shí)間的影響（略）

Tab.1Effectsofborneoland5�瞙ydroxytryptophaneondisappointmenttimeinmousetailsuspensiontest

與生理鹽水組相比:*P<0.05，**P<0.01;與等劑量5�睭TP組相比:#P<0.05

3.2大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)

與生理鹽水對(duì)照組相比，5�睭TP低、高劑量組和加冰片的5�睭TP低、高劑量組大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)5min內(nèi)的失望時(shí)間均非常顯著縮短（P<0.001），并呈劑量依賴(lài)性。冰片組無(wú)明顯影響。加冰片加5�睭TP低、高劑量組與單用5�睭TP低、高劑量組等劑量組比較，加冰片后對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)5min內(nèi)的失望時(shí)間進(jìn)一步顯著縮短（分別為P<0.01和P<0.05）。見(jiàn)表2。

3.3對(duì)利血平所致小鼠抑郁模型的影響

小鼠給予利血平(2.5mg/kg)7d后，出現(xiàn)了明顯的上瞼下垂、運(yùn)動(dòng)不能和體溫下降癥狀，小鼠全部閉眼、倦縮,耳、尾皮膚顏色灰暗，并有腹瀉發(fā)生,與正常小鼠比較差異有極顯著性，說(shuō)明給正常小鼠腹腔注射利血平后,可以造成抑郁動(dòng)物模型。

與生理鹽水對(duì)照組相比，5�睭TP低、高劑量組和加冰片的5�睭TP低、高劑量組小鼠眼瞼下垂程度和體溫下降幅度均有顯著改善（P<0.05～P<0.001），并呈劑量依賴(lài)性。單用冰片組小鼠無(wú)明顯影響。冰片加5�睭TP低、高劑量組與單用5�睭TP低、高劑量組等劑量組比較，冰片加5�睭TP低、高劑量組對(duì)抗利血平引起的眼瞼下垂和體溫下降作用顯著增強(qiáng)（P<0.05或P<0.01）。見(jiàn)表3。

表2冰片和5�睭TP對(duì)大鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)不動(dòng)時(shí)間的影響（略）

Tab.2Effectsofborneoland5�瞙ydroxytryptophaneonimmobilitytimeinratforcedswimmingtest

與生理鹽水組相比:*P<0.05，**P<0.01;與等劑量5�睭TP組相比:#P<0.05，##P<0.01

表3冰片和5�睭TP對(duì)利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降的影響（略）

Tab.3Effectsofborneoland5�瞙ydroxytryptophaneonptosisandhypothermiainreserpine�瞚nducedmicedepressedmodel

與生理鹽水組相比：*P<0.05，**P<0.01；與等劑量5�睭TP組相比：#P<0.05，##P<0.01

4討論

抑郁癥的病理生化基礎(chǔ)是人腦內(nèi)5�擦u色胺（serotonin,5�睭T）功能不足，濃度低。5�睭T在腦內(nèi)的生物合成過(guò)程是：色氨酸（tryptophan，TP）在色氨酸��5�擦u化酶的作用下，生成5�擦u色氨酸（5�睭TP），后者在芳香族L�舶彼崦擊让�(AADC)作用下脫羧形成5�睭T。5�睭TP是5�睭T的前體物質(zhì)，補(bǔ)充5�睭TP可間接提高腦內(nèi)5�睭T的濃度。

早期人們通過(guò)化學(xué)合成5�睭T供人體利用或通過(guò)增加L�采�氨酸的吸收來(lái)達(dá)到人體自身5�睭T合成量的增加，但由于生產(chǎn)合成過(guò)程的不可控性，在產(chǎn)品中夾雜著5�睭T的某些衍生物及其它雜質(zhì)，無(wú)形中增加了該類(lèi)產(chǎn)品的不安全因素。另外由于色氨酸��5�擦u化酶的特異性較高，只存在于5�睭T能神經(jīng)元中，且含量少，活性低，是合成5�睭T的限制因子。因此通過(guò)增加L�采�氨酸的吸收來(lái)增加自身5�睭T的合成量有其局限性。

5�睭TP在歐美作為治療抑郁癥的藥物一直在使用，其名稱(chēng)為Oxitriptan，在德國(guó)、法國(guó)、意大利、瑞士等國(guó)均有制劑銷(xiāo)售［5］。

冰片是龍腦香科植物龍腦香樹(shù)脂的加工品，或龍腦香的樹(shù)干經(jīng)蒸餾冷卻而得到的結(jié)晶，稱(chēng)“龍腦冰片”或“梅片”；由菊科多年生草本植物艾納香葉的升華物經(jīng)加工劈削而成，稱(chēng)“艾片”�，F(xiàn)多用松節(jié)油、樟腦等，經(jīng)化學(xué)合成而得的冰片稱(chēng)“機(jī)片”。冰片具有開(kāi)竅醒神、引藥上行之功效，不僅自身能通過(guò)血腦屏障，還能夠促進(jìn)其它藥物透過(guò)血腦屏障［6］。本研究中，冰片能顯著增強(qiáng)5�睭TP抗抑郁作用，與不加冰片的5�睭TP組比較，冰片加5�睭TP組可更顯著地縮短小鼠尾懸掛6min內(nèi)的失望時(shí)間和大鼠游泳5min內(nèi)不動(dòng)時(shí)間,改善利血平所致小鼠眼瞼下垂和體溫下降癥狀。單用冰片則無(wú)抗抑郁作用，提示冰片的作用可能是促進(jìn)5�睭TP進(jìn)入腦內(nèi)，從而增強(qiáng)5�睭TP抗抑郁作用。如將冰片和5�睭TP研制成復(fù)方的抗抑郁癥的新藥，將會(huì)提高療效，減少5�睭TP的用量和不良反應(yīng)。

5�睭TP除具有抗憂(yōu)郁癥外，還被用于減肥、戒癮、改善睡眠、緩和經(jīng)前綜合征、治療偏頭痛等。冰片能否增強(qiáng)5�睭TP在這幾方面的療效，有待進(jìn)一步研究。

【參考文獻(xiàn)】

［1］李明亞，李娟好，季寧東.石菖蒲幾種粗提取物的抗抑郁作用［J］.廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，20（4）：141-144.

［2］張均田.現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)方法［M］.北京:北京醫(yī)科大學(xué)中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社,1998：1062-1064.

［3］ELAHMADY,MAILLETP,LAURENTE,etal.NewN��(benzhydryloxyalkyl)��4��(carboxy/carbamoylmethyl)piperidinederivativeswithantidepressantactivity［J］.EurJMedChem,1997,32(3):205-218.

［4］鐘海波,潘穎,孔令東.淫羊藿提取物抗抑郁作用研究［J］.中草藥，2005，36（10）：1506.

［5］JamesEFReynolds.Martindale—Theextrapharmacopoeia［M］.Thirty�瞗irstedition.London：RoyalPharmaceuticalSociety，1996:328.

［6］趙保勝,劉啟德.冰片促血腦屏障開(kāi)放與病理性開(kāi)放的比較［J］.中藥新藥與臨床藥理，2002，13（5）：287.