今天小編就為大家分享一篇細(xì)胞培養(yǎng)的心得體會，具有很好的參考價值，希望對大家有所幫助

感謝上蒼在今天給了我一個特別的禮物，就是你。長長的人生旅程，有你相伴是我一生的幸福。祝你生日快樂！

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293細(xì)胞是用5型腺病毒75株系轉(zhuǎn)化，含有Ad5 E1區(qū)的人胚腎亞三倍體細(xì)胞系，是一種E1區(qū)缺陷互補細(xì)胞系。它是加拿大McMaster University的F.L.Graham與J.S.Miley于1976年用DNA轉(zhuǎn)染技術(shù)構(gòu)建而成。293細(xì)胞是貼壁依賴型呈上皮樣細(xì)胞，表現(xiàn)出典型的腺病毒轉(zhuǎn)化細(xì)胞的表型，細(xì)胞允許Ad5和其他血清型腺病毒在其上增殖。哺乳細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)方式有三種：貼壁培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)、無血清懸浮培養(yǎng)

什么是天長？什么是地久？說一句happy new year，讓你記住就是天長地久！

。這三種方式均可用于293細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)。293細(xì)胞在無Ca2+或含Ca2+培養(yǎng)基中可同樣生長，也可生長在血清濃度降低的培養(yǎng)基中

但是，你會關(guān)心他了，這就是說明了，你對他們有了親情。

。單層培養(yǎng)細(xì)胞在5-10%FBS-DMEM中能生長很好。一般來講，1:10傳代后，一周可以長滿。嚴(yán)禁過度生長，這點很重要。因為會導(dǎo)致細(xì)胞密度加大和堆積，影響病毒斑的形成和轉(zhuǎn)染，傳代時也不易打散

衷心地祝愿－－在你的生日和未來的每一天，你都永遠(yuǎn)充滿著歡樂。

。懸浮的293細(xì)胞很容易大規(guī)模培養(yǎng)，但不容易長期保持穩(wěn)定。293細(xì)胞在傳代120次以后，其表型可能改變，生長狀況不再完全是單層的了，偶爾會形成局部的細(xì)胞成團聚集，應(yīng)立即拋棄，重新引入新傳代的細(xì)胞。
293細(xì)胞培養(yǎng)特性：
1、293細(xì)胞明顯適應(yīng)酸性環(huán)境,pH值在6.9～7.1時,可順利貼壁生長, 換液時動作要輕。一般用高糖的DMEM培養(yǎng)基。
2、傳代：倒去廢液，PBS洗一次(輕)，用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長良好細(xì)胞，培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個懸浮細(xì)胞即可。12小時-24小時90%以上細(xì)胞貼壁。293細(xì)胞傳代時機為達(dá)80-90%匯合，傳代比例為1：3

陪伴著小池的是一座小花園。小草已經(jīng)探出了尖尖的腦袋，多鮮，多嫩。像碧玉?不，太俗氣。

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3、293細(xì)胞在低代時容易貼壁，生長良好，在傳到幾十代以后，易聚集成團，且貼壁不牢，用PBS沖洗時即可能脫落，即使消化后也不容易吹打成單細(xì)胞懸液，最好購入時先大量凍存

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4、復(fù)蘇293細(xì)胞的另一生長特性是貼壁所需時間長且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時,都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長滿瓶底的70%～80%時消化凍存,復(fù)蘇時將其全部接種至2個50ml瓶中時較為合適。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢，復(fù)蘇接種后24小時內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時左右觀察貼壁情況并進行首次更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱。
5、轉(zhuǎn)染：體外應(yīng)用293細(xì)胞進行細(xì)胞轉(zhuǎn)染時，如果是采用磷酸鈣轉(zhuǎn)染，一定要注意293細(xì)胞不要全部長滿細(xì)胞培養(yǎng)盤，長滿細(xì)胞時加入磷酸鈣就會使293細(xì)胞大-片的脫落，最好是當(dāng)293生長到1/2或2/3時進行磷酸鈣轉(zhuǎn)染，可以避免細(xì)胞的大量脫落。
其它的經(jīng)驗：1、用大瓶培養(yǎng)較小瓶要好，可能是更有利于293均勻的分布，利于營養(yǎng)的攝取
2、培養(yǎng)液要新鮮，每次只配1000ml，分為2-4瓶，不用的培養(yǎng)液，凍存在-20度，
3、要及時傳代，最好是細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部，但是細(xì)胞之間還沒有完全貼緊，總是多少有空隙的時候最好。
4、如果細(xì)胞貼壁不好，可能是消化過久，或是培養(yǎng)瓶不夠干凈，當(dāng)然要除外細(xì)胞污染。
5、如果使用用玻璃培養(yǎng)瓶或皿，可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預(yù)處理培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，方法是將明膠加入培養(yǎng)皿，使之浸泡到底面的各個部分，然后吸出，置超凈臺內(nèi)晾干即可使用。這樣處理后細(xì)胞貼壁效果好且鏡下細(xì)胞立體感強。如果是新的塑料培養(yǎng)瓶就不用處理

根深葉茂無疆業(yè)，源遠(yuǎn)流長有道財。東風(fēng)利市春來有象，生意興隆日進無疆

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