呼吸道常見病毒的臨床表現(xiàn)及實驗室診斷

　　呼吸道病毒是指以呼吸道為主要傳播途徑，能引起兒童呼吸系統(tǒng)及全身感染的一些病毒。目前已證實，95%的兒童急性上呼吸道疾病和大部分下呼吸道疾病是由細(xì)菌以外的病原引起，其中以呼吸道病毒最常見，主要包括流感病毒、副流感病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒、冠狀病毒、風(fēng)疹病毒、腺病毒和皰疹病毒等。據(jù)統(tǒng)計，兒童每年平均患急性呼吸道病毒感染2～7次。下面是小編為大家?guī)�來的關(guān)于呼吸道常見病毒的臨床表現(xiàn)及實驗室診斷的'知識，歡迎閱讀。

　　流感病毒(Flu)屬單鏈RNA病毒，可分為甲型(A)、乙型(B)和丙型(C)。流行高峰在冬春季，潛伏期1～3天，患兒發(fā)病突然，年幼兒常見高熱驚厥，多出現(xiàn)咳嗽、嘔吐等癥狀，常并發(fā)肺炎及支氣管炎。

　　人類副流感病毒(PIV)是單鏈RNA病毒.共分4型，1型是與哮喘相關(guān)的病原，6個月至3歲為多發(fā)年齡;2型PIV感染較少見且很少發(fā)生嚴(yán)重疾病.3型PIV傳染性較大，4型PIV感染僅有輕度呼吸道癥狀。

　　呼吸道合胞病毒(RSV)基因是一個負(fù)鏈RNA，是世界范圍內(nèi)嬰幼兒病毒性下呼吸道感染最重要的病毒病原。毛細(xì)支氣管炎發(fā)病率在2月齡的嬰兒中最高，6個月～12個月的要兒RSV肺炎的發(fā)生率最高，3歲以后小兒RSV感染時，毛細(xì)支氣管炎已較少見。每年45%～50%住院嬰幼兒毛細(xì)支氣管炎是由RSV直接感染所致。

　　腺病毒(ADV)屬于DNA病毒，有100多個型別。腺病毒肺炎是嬰幼兒期危害較大的疾病，潛伏期平均4～6天，其臨床特點是高熱且持續(xù)時間長，有明顯的神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，呼吸困難，但肺部體征出現(xiàn)較晚，全身各系統(tǒng)均可受累。約80%的腺病毒肺炎發(fā)生在6個月至2歲的小兒，年長兒病情較輕，或僅表現(xiàn)為上呼吸道感染的癥狀。

　　麻疹是由麻疹病毒(MV)引起的以發(fā)熱、呼吸道卡他癥狀和出疹為主的急性傳染病，廣泛流行于全世界。肺炎是麻疹最常見的并發(fā)癥，約占10%或稍多，大多見于出疹期。麻疹病毒只有一個血清型，6個月至5歲兒童發(fā)病率最高，病后免疫力持久。

　　流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒(MUMPS)所致的急性呼吸道傳染病，以腮腺的非化膿性腫脹和疼痛為特征，傳播途徑主要為通過唾液飛沫吸人。腮腺炎病毒的基因組為單股負(fù)鏈RNA，只有一個血清型。1～2歲兒童腮腺炎病毒感染主要表現(xiàn)為呼吸道和肺部癥狀，冬春兩季的發(fā)病人數(shù)要多于夏季。

　　1.病毒分離及鑒定(以RSV為例)

　　(1)操作程序：用負(fù)壓吸取患兒鼻咽深部分泌物1～2ml，加入PBS2～3ml，用吸管反復(fù)吹打至分泌物完全混勻，2000rpm離心10分鐘，棄去上清、沉淀物再次做上述處理，用上清液接種于Hep-2或MDCK細(xì)胞，在含有2%牛血清的MEM培養(yǎng)基中生長，33℃旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)，連續(xù)觀察細(xì)胞變化，出現(xiàn)特征性融合病變者為陽性;若盲傳3代仍無病變出現(xiàn)，則確定為陰性。

　　(2)方法學(xué)評價：該法雖然特異性較強，但試驗周期時間長，一般1～2周才能有結(jié)果，且成本較高,如果傳代細(xì)胞不敏感，或存在細(xì)菌、支原體混合感染等情況，會導(dǎo)致病毒分離的陽性率低，標(biāo)本內(nèi)病毒含量少時亦會出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此臨床不作為常規(guī)檢測使用。

　　2.間接法ELISA(以麻疹病毒IgM為倒)

　　(1)實驗原理：間接法HLISA主要用于檢測抗體，它是將已知抗原包被在固相載體，加上待測抗體的標(biāo)本，最后用酶標(biāo)抗抗體間接的將其檢出。

　　(2)操作程序：①稀釋標(biāo)本將血清標(biāo)本用稀釋液1：100倍稀釋，放置15分鐘后加入酶標(biāo)板中，每次實驗加入陰、陽性對照及空白對照各一孔，每孔100μl，室溫30分鐘;②洗板4次，在吸水紙上拍干;③加入酶標(biāo)記物，每孔100μl，室溫30分鐘;④重復(fù)步驟②;⑤人底物液，每孔l00μl，室溫避光15分鐘顯色;⑥加入終止液，每孔100μl，以450nm波長測量其OD值;⑦結(jié)果判斷：臨界值=陽性對照值×0.2+陰性對照值

　　標(biāo)本OD值<臨界值×0.85，判為陰性結(jié)果，標(biāo)本OD值>臨界值×1.15，判為陽性結(jié)果，介于二者之間為可疑值，應(yīng)于7～14日后重新采集新鮮樣品檢測。

　　3.注意事項

　　(1)檢測IgM抗體時，因試荊盒提供的稀釋液中已經(jīng)含有類風(fēng)濕因子(RF)吸附劑，可去除RF的干擾，但稀釋后必須放置15分鐘以上或4℃過夜，加樣時應(yīng)吸取上清層，不要吸到沉淀物。

　　(2)間接法ELISA可用于檢測麻疹病毒IgM/IgG，腮腺炎病毒IgM/IgG，及腺病毒IgM等。此方法適合于回顧性診斷或做流行病學(xué)調(diào)查，對早期診斷意義有限。

　　(3)小嬰兒免疫反應(yīng)較差，RSV抗體升高較慢，恢復(fù)期也見不到4倍以上升高，因此ELISA法檢測RSV抗體不用于臨床診斷。

　　4.臨床意義患兒感染麻疹病毒后，出疹3天內(nèi)75%可檢測出IgM抗體，7～14天IgM達(dá)到高峰，一般一個月后IgM明顯下降，2～3個月內(nèi)完全消失。IgG抗體常與IgM抗體同時或稍晚出現(xiàn)，25～30天達(dá)更高，6個月內(nèi)下降2～4倍.以后下降緩慢，維持在一定水平。所以在出疹后3天至一個月內(nèi)檢測患兒血清IgM抗體，可為臨床醫(yī)生確定其病原提供依據(jù)，發(fā)病后7～14天內(nèi)用ELISA法檢測MV-IgM抗體陽性率最高。