淺談病理制片中固定液的選擇

　　[論文關(guān)鍵詞]病理；固定液；甲醛；乙醇 [論文摘要]在病理組織診斷中制片過程尤為重要，而在病理制片的過程中組織的固定更為關(guān)鍵，故而對于石蠟切片，組織的固定則是必不可少的重要步驟。在多年的經(jīng)驗中，筆者對AF、AAF及甲醛一生理鹽水三種混合固定液的優(yōu)劣進行仔細分析、對比，從而認為混合固定液與其他固定劑固定效果相比之下較為優(yōu)越。

　　由于病診斷是診斷的金標準，是輔助臨床診斷的主要把關(guān)口，也是最后的宣判性診斷。做好病理診斷，層層步驟就顯得尤為重要，包括組織的取材，固定，脫水，浸蠟，包埋及染色。組織的固定是一個關(guān)鍵的過程，因為沒有好的固定就沒有好的制片，沒有好的制片就不會有好的成品，一張好的切片與固定有著密切的關(guān)系。

　　1 固定的目的

　　固定的概念是將采取的活體組織置于化學性溶媒(固定液)中，使其不發(fā)生自溶與腐化，保持被采取時的形態(tài)。

　　固定的目的是在于盡量使組織和細胞保持與生活時相仿的成分和形態(tài)，迅速防止組織、細胞的死后變化，防止自溶與腐化，使細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、脂肪、糖、酶等各種成分轉(zhuǎn)變成不溶性物質(zhì)，使組織中的`各種物質(zhì)沉淀和凝固起來，而產(chǎn)生不同的折射率，造成光學上的差異，以便染色后易于鑒別和觀察。因此，固定的組織愈新鮮愈好，固定組織時，應(yīng)使用足量的固定液。其固定液的量一般小于組織塊總體積的4倍以上。

　　2 固定液的選擇

　　固定液必需要有較強的滲透能力，能迅速地滲入組織內(nèi)部，不會使組織過度收縮或膨脹，并且能使組織內(nèi)易觀察的成分可以凝固為不溶性物質(zhì)，能使組織達到一定的硬度，獲得較佳的折光率和對染料具有較強的親和力。組織細胞中不至于因固定引起人為的改變，因為在凝固原生質(zhì)以后，增加了細胞對于各種穿透的抵抗力，不至于因以后的處理而使固定后的原生質(zhì)變形，并盡可能地避免使組織膨脹或收縮，使細胞內(nèi)的成分(蛋白質(zhì))凝固沉淀下來，由正常的半液體狀(膠體)變?yōu)榘牍腆w狀(凝膠)，增加媒染作用和染色能力，使組織能夠得到充分的固定，便于以后的蠟塊保存。

　　固定液的種類很多，分為單純固定液和混合固定液，其中混合固定液比較常用。

　　2.1常用單純固定液

　　2.1.1甲醛(formaldehyde)為非沉淀性固定劑，是一種約有40％重量溶于水的氣體，易揮發(fā)，市售的為40％的甲醛水溶液，也稱為福爾**液(formalin)。此液久存自行分解，形成白色沉淀為副醛(三聚甲醛或多聚甲醛)。用于組織固定的濃度為10％，實際濃度含甲醛為4％。其固定液滲透能力很強，固定均勻，對組織收縮小，故而對于免疫組織化學標本的制作常用此液。

　　2.1.2乙醇(alcoh01)即乙醇，為還原劑，無色液體，可與水無限相溶，固定兼脫水，用于固定的濃度為80％－95％。用于糖原、纖維蛋白及彈性纖維的固定，乙醇的滲透力較甲醛弱，能沉淀白蛋白、球蛋白。缺點為滲透能力相對較弱，且易揮發(fā)和吸收空氣中的水分，故而使用時應(yīng)蓋好容器；并對色素有破壞。

　　2.1.3醋酸(aceticacid)又名乙酸，為帶有刺激氣味的無色液體，低于15℃為冰醋酸，可溶于水，可較好地保持染色體結(jié)構(gòu)，把未分裂細胞核的染色質(zhì)沉淀為塊狀體，從而更清楚地顯示細胞核結(jié)構(gòu)。5％的醋酸pH 2－8，可抑制細菌和酶的活性，可防止自溶，缺點為組織膨脹較明顯，對于膠原纖維與纖維蛋白尤其明顯。一般很少單獨使用。

　　2.2常用混合固定液

　　2.2.1 AF液(乙醇+甲醛液)配方：95％乙醇或無水乙醇90ml+40％甲醛10ml。此液不但有甲醛的固定作用，并兼有脫水作用，用于固定肥大細胞和糖原，效果較好，米粒大小的胃鏡等標本需要4－6h，其余外檢的大塊組織需用12－24h，其優(yōu)點是固定后可不經(jīng)水洗，直接放人95％E,醇繼續(xù)脫水，大大減少了脫水的過程和縮短了脫水時間，增加了工作效率。

　　2.2.2 AAF液(醋酸+乙醇+甲醛液)配方：95％E,醇或無水乙醇85 ml+醋酸5 ml+甲醛液10 ml。此液對染色質(zhì)固定較好，由于醋酸能使組織膨脹，因此可抵償因乙醇、甲醛等固定液引起的組織收縮和硬化，故常作為混合液而使用。AAF固定液的缺點是組織固定后對細胞膜上的蛋白質(zhì)和細胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu)有一定的破壞作用，而對免疫組織化學染色有一定的影響。

　　2.2.3甲醛－生理鹽水配方：甲醛液10 ml+生理鹽水90 ml。應(yīng)用較廣泛，pH為7，此液可用于保護脂類和細胞核。送檢組織標本在手術(shù)切下或活檢離體后，細胞結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，為保持細胞與生活時的形態(tài)相似，必需迅速滲入組織來固定原生質(zhì)。如果當時沒有合適的固定液，可以浸泡在生理鹽水中保存。此液可保護類脂與細胞核，在酸性染色(如V-G染色)或三重染色之前可做二次固定。

　　3 小結(jié)

　　由于醇類對低分子蛋白質(zhì)、多肽及胞質(zhì)內(nèi)蛋白質(zhì)的保存效果較差，解決的方法是與其他試劑混合使用，例如加冰醋酸、乙醇、氯仿、甲醛等。在病理中，現(xiàn)在很少單獨使用醛類、醇類等作為組織固定液，多數(shù)為混合固定液。根據(jù)以上比較，證明混合固定液為多種組織及細胞的良好固定液，且優(yōu)于單獨固定液及其他固定劑，根據(jù)不同組織的性質(zhì)及不同的工作狀態(tài)，在的實踐工作中可選用適宜的固定液。